 Show Phương pháp nhuộm Ziehl Neelsen được phát triển bởi hai nhà khoa học là Ziehl và Neelsen. Trong phương pháp này Neelsen đã sử dụng Ziehl’s carbol-fuchsin và nhiệt và sau đó khử màu với cồn axit, và đếm các tế bào được nhuộm màu với methylene blue. Mục đích của kỹ thuật này để phân biệt nhóm vi khuẩn bền vững với axit (acid-fast bacteria) và không bền vững với axit. Phương pháp này đặc biệt hữu ích để xác định các vi khuẩn thuộc chi Mycobacterium như M. tuberculosis, M. ulcerans, và M. leprae và mycobacteria không gây hại do chúng không thể được nhuộm bằng phương pháp gram thông thường. Nguyên lý của phương pháp nhuộm Ziehl NeelsenKhi tiêu bản được nhuộm với carbol fuchsin, nó hòa tan vật liệu lipid có mặt trong thành tế bào Mycobacterial bởi nhiệt. Carbol fuchsin tiếp tục xuyên qua thành lipid và tiến vào tế bào chất. Do đó tất cả tế bào có màu đỏ. Mẫu tiêu bản sau đó được khử màu với hóa chất (3% HCL trong cồn 95%) nhưng những tế bào bền với axit vẫn có màu đỏ do sự có mặt của lượng lớn vật chất lipid trong thành tế bào bởi vậy ngăn chặn sự đi qua của dung dịch khử màu. Những tế bào không bền với axit thiếu vật liệu lipid trong thành tế bào bởi vậy chúng dễ dàng bị khử màu, dẫn đến tế bào không có màu. Tiêu bản tiếp tục được nhuộm với methylene blue. Chỉ những tế bào đã khử màu mới hấp thụ và nhuộm màu xanh methylene và có màu xanh trong khi các tế bào bền với axit có màu đỏ. Quy trình nhuộm AFB staining
Bộ kit nhuộm Ziehl Neelsen
Hãy liên hệ với chúng tôi để nhận được tư vấn chi tiết về sản phẩm. Ngoài ra chúng tôi còn cung cấp nhiều hóa chất thiết bị khác như: vitamin B1, RBA agar, sabouraud glucose agar, myo-inositol… Chúng tôi rất mong nhận được sự hỗ trợ của Quí khách hàng. Do tế bào vi khuẩn kháng acid có lớp vỏ sáp bao bọc nên khi đã nhuộm được phức hợp màu carbolfuchsin, phức hợp này sẽ không bị tẩy màu bởi dung dịch tẩy màu mạnh (acid, alcohol acid). Tuy nhiên để phức hợp màu này có thể thấm xuyên qua lớp vỏ sáp của vi khuẩn, có hai cách: (1) Đun nóng phết nhuộm với dung dịch màu carbolfuchsin, nhờ đó mà carbolfuchsin thấm qua lớp vỏ sáp của vi khuẩn để nhuộm màu vi khuẩn; đây là phương pháp nhuộm nóng Ziehl Neelsen. (2) Phương pháp thứ hai là phương pháp nhuộm lạnh còn gọi là phương pháp Kinyoun, trong phương pháp này người ta dùng dung dịch carbolfuchsin đậm đặc, nhờ vậy khi phủ dung dung dịch màu đậm đặc này lên phết nhuộm với thời gian lâu, carbolfuchsin vẫn có thể thấm qua lớp vỏ sáp để nhuộm màu vi khuẩn. 2. Chuẩn bị - Dụng cụ: Lam kính sạch, que cấy, giá nhuộm, giá cắm, bôcan, … - Hoá chất: Các thuốc nhuộm Ziehl Neelsen: fuchsin kiềm với phenol; cồn acid, xanh methylen blue. Bộ thuốc nhuộm kháng acid được chứa trong các chai sẩm màu, nắp vặn chặt, giữ trong tối ở nhiệt độ phòng. - Bệnh phẩm: Đờm hoặc các dịch khác như dịch màng não, dịch màng phổi… 3. Cách tiến hành - Trước hết đánh dấu tiêu bản. - Cố định tiêu bản bằng cách nhỏ 1 giọt cồn 90[sup]0[/sup] lên tiêu bản rồi đốt cháy cồn hoặc hơ qua ngọn lửa đèn cồn 3 lần. - Phủ thuốc nhuộm Fuchsin Ziehl kín hết diện tích dàn, bệnh phẩm, dùng que bông cồn đốt cháy nhẹ dưới lam kính đến khi trên mặt đồ phiến bốc hơi thì thôi, đốt như vậy 3 lần. Rửa dưới vòi nướ chảy nhẹ. - Tẩy màu với hỗn hợp cồn acid bằng cách nhúng tiêu bản vào bình chứa cồn acid, khi nào đưa lên chỉ còn vết đỏ nhạt là được. - Rửa nước - Nhuộm xanh methylen 30 giây, rửa nước, để khô soi kính hiển vi. 4. Đọc kết quả - Quan sát phết nhuộm kháng acid qua kính hiển vi, dưới vật kính dầu, trực khuẩn kháng acid bắt màu đỏ cánh sen, mảnh, còn vi khuẩn thường cũng như các nền khác như tế bào biểu mô hay bạch cầu bắt màu xanh. - Khi trả lời một kết quả nhuộm kháng acid, không được kết luận là dương tính M. tuberculosis mà chỉ trả lời là có hiện diện trực khuẩn kháng acid. 5. Các sai lầm kỹ thuật có thể gặp trong phương pháp nhuộm kháng acid - Phết nhuộm quá dày sẽ làm alcohol acid không thể tẩy hết màu carbolfuchsin, vì vậy những trực khuẩn không kháng acid vẫn bắt màu đỏ cánh sen. Tuy nhiên được có thể phân biệt đây không phải là vi khuẩn kháng acid khi quan sát màu vùng nhầy hay tế bào biểu mô hay bạch cầu xung quanh vẫn còn màu đỏ chứng tỏ màu không bị tẩy hết. Ngoài ra, trực khuẩn không có hình dạng tiêu biểu của trực khuẩn kháng acid: mập, không mảnh khảnh như trực khuẩn kháng acid thực sự. - Màu carbolfuchsin bị cặn, sẽ đóng lên phết nhuộm làm alcohol acid không thể tẩy hết màu và do vậy vi khuẩn thường vẫn nhuộm màu đỏ cánh sen như trên. Để tránh tình trạng này, phải thường xuyên lọc màu qua giấy lọc mỗi khi kiểm tra nhỏ màu carbolfuchsin lên một lam trống thấy có cặn sau khi đổ bỏ carbolfuchsin khỏi lam. - Để tránh các sai lầm trên, nên nhuộm kiểm tra chất lượng trước mỗi lô thuốc nhuộm mới pha và định kỳ mỗi tháng một lần đối với lô thuốc nhuộm đang sử dụng. roseline_20191 Offline Thành viên thử việc Bài viết: 1 Chủ đề: 0 Gia nhập: Oct 2012 Danh tiếng:0 Thanks: 0 Given 0 thank(s) in 0 post(s) Points: 0$ cho xin font chữ của trang thi trắc nghiệm chuyên ngành ak. phuhmtu Offline Old Moderator Bài viết: 2,050 Chủ đề: 1,409 Gia nhập: Sep 2012 Danh tiếng:6 Thanks: 0 Given 12 thank(s) in 12 post(s) Points: 12$ B chuyển mã trình duyệt sag UTF-8 nhé yul Offline Thành viên thử việc Bài viết: 2 Chủ đề: 0 Gia nhập: Jan 2013 Danh tiếng:0 Thanks: 0 Given 0 thank(s) in 0 post(s) Points: 0$ cho em hỏi vì sao phải lấy 3 mẫu đàm: tại chỗ, buổi sáng, tại chỗ ạ? tuyenlab Offline Administrator Bài viết: 3,644 Chủ đề: 1,637 Gia nhập: Dec 2011 Danh tiếng:8 Thanks: 5 Given 91 thank(s) in 82 post(s) Points: 29,750.32$ (06-25-2014, 11:35 AM)yul Đã viết: cho em hỏi vì sao phải lấy 3 mẫu đàm: tại chỗ, buổi sáng, tại chỗ ạ? Vì không phải lúc nào cũng có vk trong mẫu đờm, do đó phải lấy ở các thời điểm khác nhau để xác suất tìm được là cao nhất. |
